諾博萊德 膜蛋白提取試劑盒

膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P4904

產(chǎn)品名稱：膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4904 膜蛋白提取試劑盒

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品介紹

膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織提取總膜蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

使用前請(qǐng)注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以 2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品介紹：

膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，

適用于從動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織提取總膜蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 將蛋白提取的時(shí)間縮短至 1 小時(shí)

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

操作步驟：

一、使用注意事項(xiàng)

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

6. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

7. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

8. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

9. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過(guò)程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

二、細(xì)胞膜蛋白提取

1. 提取液準(zhǔn)備：

每 500μL 冷的蛋白提取液 A 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 500μL 膜蛋白溶解液 C 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取 5-10×106 個(gè)細(xì)胞，在 4℃，500×g 條件下離心 5min，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干收集細(xì)胞。

3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 細(xì)胞樣品中加入 200μL-400μL 冷的試劑 A，充分混勻。

5. 在 2-8℃條件下振蕩 20-30min，至細(xì)胞充分裂解，細(xì)胞沉淀明顯減少。

6. 在 4℃，12000×g 條件下離心 5min。

7. 將上清吸入另一干凈離心管，在 37℃水浴 5-10min。

8. 在 37℃，1000×g 離心 5min，此時(shí)溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為 30-50μL。

9. 小心移除上層液體，收集上層部分留作備用分析。

10. 用150-200μL冰冷的試劑B充分溶解下層膜蛋白部分，混勻后冰浴2min，37℃水浴5-10min，37℃，1000×g 離心 5min，此時(shí)溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為 30-50μL。小心移除上層液體，保留下層。

11. 按以上步驟再次抽提下層膜蛋白(此步驟可以選做，一般不需要做)。

12. 用 50-200μL 冷的試劑 C 膜蛋白溶解液溶解下層膜蛋白部分，即得膜蛋白

13. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

三、組織樣本膜蛋白提取

1. 提取液準(zhǔn)備：

每 500μL 冷的蛋白提取液 A 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 500μL 膜蛋白溶解液 C 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取 50mg-100mg 適量組織樣本，用冷 PBS 洗干凈，然后用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，加 400μL冷的試劑 A，用組織勻漿機(jī)/器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見固體。

3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在 4℃條件下振蕩 20-30min。

4. 按照細(xì)胞蛋白的提取方法的第（5）步驟往下操作即可。

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低？

膜蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大細(xì)胞的上樣量以提高膜蛋白濃度。處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解wan全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑 A 的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2. 用什么方法定量蛋白？

建議用 BCA 法。不適合用 Bradford 法，因?yàn)樵噭?A 中含有干擾 Bradford 法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用 Bradford 法定量。

3. 膜蛋白電泳沒有條帶？

膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進(jìn)行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進(jìn)行蛋白定量。蛋白加 Loading buffer 后可以不用煮沸，采用 50℃保溫 30min。蛋白 Loading buffer 中 SDS 終濃度含量可以提高至 3%-10%。有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。電泳時(shí)最好采用低電壓低電流電泳。膜蛋白豐度通常較低，有條件可以嘗試用銀染染色。

4. 提取的蛋白具有活性嗎？本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

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P4904  膜蛋白提取試劑盒  50T/100T