諾博萊德 植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（酶法）

植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(酶法)常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5017

產(chǎn)品名稱：植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（酶法）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（酶法）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5017 植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（酶法）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便，制備的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的蛋白，回收率相比非酶法稍有提高，蛋白純度高，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。非酶法提取過程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在1小時(shí)內(nèi)完成，絕少交叉污染，保持天然活性，但是蛋白回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度和蛋白活性沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

適用樣本：植物

注：

各組份儲(chǔ)存條件:

蛋白提取液2-8℃保存

蛋白酶抑制劑-20℃保存。

提取液A長(zhǎng)期不用請(qǐng)置-20℃保存。

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

自備試劑和儀器

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷:所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、操作步驟

1、提取液準(zhǔn)備：

每300ul提取液D中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

注：根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2．取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-500mg植物組織樣本用手shu剪刀盡可能剪碎。

注：也可用鋒利的刀片將葉片樣本切成盡可能小的小方塊(1-2mm)。

3．加入500ul 試劑A，充分混勻。

注：可以將葉片組織在液氮中冷凍后稍微搗碎成細(xì)的粉末后再加入試劑A. 4．在30℃條件下靜置15分鐘。

5．在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

6．在沉淀中加入0.5ml提取液B，充分混勻。

注：培養(yǎng)細(xì)胞 1000xg條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞后用PBS洗滌2次，然后直接加入提取液B重懸。

大約每300ul 細(xì)胞壓積中加入 1ml提取液B。

根據(jù)實(shí)際樣本體積調(diào)整提取液用量，一般試劑是樣本體積的2-3倍，充分淹沒樣本即可。

7．將提取液B樣本懸液置振蕩器37℃-45℃或室溫振蕩24-72小時(shí)。

注：使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

根據(jù)下游核糖體的應(yīng)用選擇合適的溫度，最高溫度為55℃時(shí)制備速度最快。但是溫度過高會(huì)影響樣本活性，請(qǐng)根據(jù)下游應(yīng)用選擇溫度。

不同類型的植物樣本需要處理的時(shí)間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時(shí)間短。擬南芥嫩葉最短4小時(shí)即可。

部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長(zhǎng)時(shí)間?？梢匝娱L(zhǎng)至72小時(shí)以上處理以提高得率。

8．在2000×g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

注：有條件的話最好用100um細(xì)胞篩網(wǎng)過濾提取液B處理液后，收集濾液再離心。

沒有細(xì)胞篩可以不過濾。

9．在沉淀中加入1000ul 試劑C重懸沉淀，充分混勻。

10．用勻漿機(jī)充分勻漿或者用Dounce勻漿器充分勻漿。

注：一般用Dounce勻漿器的勻漿30-40次。

每上下一個(gè)來回為一次。

11．將勻漿液置4℃振蕩20-30分鐘。

注：用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微有晃動(dòng)即可。

沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

12．在500×g 條件下離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。

13．在1000×g 條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

14．將上清20000×g 離心10分鐘。棄沉淀，取上清。

15．將上清30000-50000×g 離心45分鐘。棄上清，留沉淀。

注：如果條件允許，可將離心力加大到100000×g，有利于回收內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小泡。

16．在沉淀中加入100-300ul提取液D，充分混勻。

17．置振蕩器2-8℃振蕩30分鐘。

注：用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動(dòng)即可。

沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

18．在 4℃，12000×g 條件下離心15分鐘。

19.將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白。

20.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

注：建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(酶法)常備現(xiàn)貨

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